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抗體抗原測(cè)定的Elisa方法

 更新時(shí)間:2024-10-23 點(diǎn)擊量:123
  在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上,用于測(cè)定各種各樣的抗原、半抗原和抗體,Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡(jiǎn)便、靈敏、快速的測(cè)定方法。那讓我們一起來看看抗體抗原測(cè)定的Elisa方法吧!
  抗體抗原測(cè)定的Elisa方法一:直接法
  1、將抗原吸附在固相載體表面;
  2、添加一種封閉試劑,防止檢測(cè)抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合;
  3、添加直接偶聯(lián)某種酶(如HRP)的檢測(cè)抗體。該檢測(cè)抗體將結(jié)合抗原,并且剩余的抗體會(huì)從孔中洗掉;
  4、添加這種酶的底物;
  5、短暫孵育后,在酶標(biāo)儀上測(cè)定每個(gè)孔的信號(hào)。
  抗體抗原測(cè)定的Elisa方法二:間接法(測(cè)定抗體效價(jià))
  1、首先將過量的抗原加入聚苯乙烯微量反應(yīng)板的四孔中進(jìn)行吸附,洗滌除去未吸附抗原;
  2、將待測(cè)抗體(一抗)溶液加入反應(yīng)凹孔,溫育,形成抗原-抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白;
  3、加酶標(biāo)記抗抗體(二抗),溫育后洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物;
  4、加入底物生成有色產(chǎn)物,加終止液終止酶促反應(yīng),日測(cè)或用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值,計(jì)算第一抗體量。酶標(biāo)第二抗體是將第一抗體免疫另一種動(dòng)物,將抗體純化再與酶交聯(lián)而成的。
  抗體抗原測(cè)定的Elisa方法三:夾心法(測(cè)定抗原量)
  1、將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的特異性抗體的免疫球蛋白加入聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔中進(jìn)行吸附,洗滌除去未吸附抗體;
  2、將待測(cè)抗原溶液加入反應(yīng)凹孔,溫育形成抗原-抗體復(fù)合物、洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白;
  3、再加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的的特異性抗體,經(jīng)溫育形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物,洗滌;
  4、加入抗第二種動(dòng)物抗體的酶標(biāo)記抗體,溫育后洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物;5、加底物生成有色產(chǎn)物,終止酶促反應(yīng),用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值,經(jīng)計(jì)算得到抗原量。
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